凍存細胞如何有效復(fù)蘇？

一般來說，細胞進行轉(zhuǎn)移，最佳的方法是進行低溫保存（-70℃~-196℃），而細胞進行低溫保存的基本原理是：在-70℃以下時，細胞內(nèi)的酶活性均已停止，即代謝處于停止?fàn)顟B(tài)，故而可以長期保存。

細胞低溫保存的關(guān)鍵在于0~20℃階段的處理過程，因為在此溫度范圍內(nèi)，冰晶呈針狀，極易招致細胞的嚴(yán)重損傷。

所以復(fù)蘇細胞應(yīng)采用快速融化的方法，這樣可以保證細胞外結(jié)晶在很短的時間內(nèi)融化，避免緩慢融化使水分滲入細胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶，對細胞造成損傷。

1）所需材料

· 含有細胞的凍存管；

· 37℃水浴鍋；

· 37℃預(yù)熱的生長培養(yǎng)基；

2）細胞的復(fù)蘇流程

1．佩戴眼鏡和手套，從液氮罐中取出冷凍管；

2．迅速放入37℃水浴中，并不時搖動，在1分鐘內(nèi)使其融化，然后在無菌下取出細胞；

3．在150g速度下離心5～10分鐘，棄去上層液；

4．加入適量培養(yǎng)液后接種于培養(yǎng)瓶中，接種濃度1×10 ⁹ cell/L，置37℃恒溫箱靜置培養(yǎng)；

5．次日更換一次培養(yǎng)液，繼續(xù)培養(yǎng)，觀察生長情況；

6．若細胞密度較高，及時傳代。

3）注意事項

在細胞復(fù)蘇時，應(yīng)注意融化凍存細胞速度要快，要不時搖動冷凍管，使之盡快通過最易受損的溫度段(-5～0℃)。這樣復(fù)蘇的凍存細胞存活率高，生長及形態(tài)良好。

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